分光光度計的性能檢查
(1)波長校正：在更換光源燈、重新安裝、運輸或檢修后，或儀器不能正常工作時，使用光電比色計或分光光度計進行波長校正。對于正常工作的儀器，應每隔一個月檢查一次波長，必要時應進行校準，以確保波長讀數(shù)與通過樣品的波長和儀器的靈敏度一致。方法 常用的光譜釹濾光片校準法適用于721儀器可見光區(qū)的波長校準。通常以 585nm 或 529nm 處的吸收峰或 T% 作為標準。鑒于721儀器的發(fā)射光波長較寬，573nm和585nm兩個峰谷不容易分離，校準時容易出現(xiàn)誤差。因此，建議使用 529nm 處的峰值或谷值作為波長校準的標準。校準時，根據(jù)需要預熱儀器。要求電源電壓穩(wěn)定。將波長板設置在580nm，將T%調到，在比色皿上放一張白紙，觀察是否有光強均勻的光斑，邊緣無光暈或雜散光。如果不符合要求，調整燈泡位置使之符合要求是對波長校正的粗調。然后將靈敏度設置為“1"（zui低檔），將波長刻度盤對準529nm，儀表機械零位為零，光路空白時將T%調整為100%T，檢查零點和100%T 反復穩(wěn)定。將釹光譜濾光片插入光路中，緩慢旋轉波長盤，找到透光率zui低的點（左右旋轉波長盤時，該點的透光率值增加），這點是波長529nm。檢查波長盤的指示值是否為529nm，如果指示值為534nm，此時波長誤差為5nm，如果超出規(guī)格（±1nm）必須調整。
調整方法：將波長盤對準529nm，從光路中取出光譜釹濾光片，在光路空白時將儀表指針調至100%T，然后將光譜釹濾光片插入光路。打開儀器左側的小蓋，找到波長校正螺絲（三個中與左手柄長度相同的那個）；逆時針方向調整（負誤差為順時針方向），使儀表指針的T%zui低。反復檢查波長誤差，直到符合儀器的技術指標。合上左邊的小蓋，校準結束。
一些gao端儀器如島津UV-260雙光束分光光度計可以在測量比色池中使用氫燈或光譜釹濾光片。對濾光片掃描程序進行編程后，儀器可在一定波長范圍內自動進行波長校正。gao端分光光度計的光學系統(tǒng)密封在一個單元組件中。如果出現(xiàn)故障，波長不準，往往需要請廠家派人維修。還有其他方法如譜線校正法、干涉濾光片校正法和有色溶液校正法等，請參考相關資料。
(2)線性檢查：線性檢查包括儀器線性和測量方法線性的檢查。線性誤差表現(xiàn)為溶液濃度與吸光度的非線性關系，存在正偏差或負偏差現(xiàn)象。這種偏差，根據(jù)比爾定律，來自兩個方面：一是溶液本身不符合比爾定律，這種現(xiàn)象稱為化學偏差；另一種是儀器本身的各種因素的影響，使得吸光度測量值與濃度的關系不是線性的，這種現(xiàn)象稱為儀器偏差。這里研究后者。儀器偏差的因素很多，如雜散光、有限帶寬、檢測器噪聲、環(huán)境條件變化、波長變化、比色皿誤差、輻射的非平行性以及檢測器本身的非線性等。
儀器的線性檢查常使用已知在一定波長和一定濃度范圍內服從比爾定律的有色物質，并與不同濃度的溶液混合，檢查儀器本身是否能如實反映樣品的濃度變化。有色物質。該檢驗方法與被測物質的顏色反應等任何方法學問題無關。根據(jù)濃度繪制測量的吸光度，理想情況下應該是一條直線。常用的方法是使用0.8、1.6、2.4、4.0 mg/L Evan Blue濃度系列進行檢查，波長為610nm。
(3)雜散光(散光)檢測：在吸光度測量中，檢測器感覺到的所有不需要的輻射稱為雜散光。雜散光對吸光度測量的準確性有嚴重影響，但往往被忽視。雜散光的來源包括： ①儀器本身的原因，如單色器的設計、光源的光譜分布、光學原件的老化程度、帶寬、儀器內部的反射和散射; ②室內光線過強漏光 儀器與儀器暗室蓋板不嚴密； ③樣品本身的原因，如樣品是否有熒光，樣品的散射能力等。
雜散光檢測法： ① 10±0.1g/L碘化鈉溶液可用于紫外區(qū)雜散光監(jiān)測，240nm處測吸光度應大于2.00。另外，也可用12g/Llu化鉀溶液測220nm處的透光率，即雜散光量，一般應小于1%T。以上所有測定均使用石英杯進行，并用蒸餾水調零。 ②在可見光區(qū)可用光譜釹過濾器或硫酸鎳法檢查。先用光譜釹濾光片校準波長，然后用黑紙擋住比色皿的光路（進口儀器有比色皿狀的黑柱），然后調到0%T，再用空氣使空白調整到 100%T。插入光譜釹濾光片，在585nm處測量，測量值為雜散光級。
(4)比色皿的質量檢驗：比色皿一般由玻璃、石英或螢石制成，光徑為1.0或0.5cm。光線通過時，一部分光線因空氣與玻璃接觸面的反射而損失（4%），另一部分（很少）被玻璃吸收。除了比色杯的質量，玻璃的厚度均勻，頂部和底部相同，杯子相互匹配。廠家一般供應四件套，杯口上部外側有一個箭頭，箭頭用在光源一側。盡管如此，在使用前應進行質量檢查。常用伊文藍法：將一定量的2.0mg/L伊文藍溶液倒入比色皿中，比色皿內液面應相等。以比色皿為標準，使用紅色濾光片（波長600-610nm），用水校零后將這個杯子的讀數(shù)調整到50%T，然后讀取剩余杯子的透光率。透光率差在±0.5%T以內者為合格。
(5)穩(wěn)定性檢驗：檢驗方法：將分光光度計及附件接0.5kVA以上可調變壓器，先調電壓220V，波長固定在650nm，在光路比色杯中裝空白液調節(jié)時讀數(shù)為90%T，將電壓升到230V再降到190V，觀察透光率的漂移值。如果在88.5%～91.5%T之間，則為合格。在電源電壓恒定的情況下，3分鐘內讀數(shù)漂移不應超過刻度上限的±0.5%。
(6) 重復性檢驗：在波長、工作狀態(tài)、電源電壓、比色皿匹配等合格的前提下進行重復檢驗。當由交流電源供電時，儀器重復測量的溶液讀數(shù)之間的差異應小于或等于刻度上限的 1%。測試方法：在120-150攝氏度下干燥分析純二絡合鉀2小時，并在干燥器中冷卻。稱取509.1mg于1000ml容量瓶中，用蒸餾水溶解并加至刻度，混勻（此溶液為180mg/L鉻）。所用溶液為 30、60、180 毫克鉻/升。取波長440nm，連續(xù)測量每個應用溶液的濃度管3-5次，濃度管中的一個誤差小于1%T為合格。
(7)靈敏度檢查：將重鉻酸鉀溶液配制成30和32.5mg鉻/L和120和122.5mg/L鉻4個應用溶液(兩組鉻濃度差為2.5mg/L)。波長為440nm，用水調零點，連續(xù)測定上述應用溶液的吸光度3次，兩組2.5mg/L鉻濃度差的吸光度差不小于0.01為合格
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